材料與方法

使用深海潛水器“阿爾文號”在黑崖海丘（32°29.623'N 76°11.467'W；2155米；2003年7月-8月）從活蛤床（N=13）、蛤殼床（N=19）和混合床（N=5）采集推桿巖心（直徑6.35厘米，長度30厘米）。還從無非滲口背景沉積物（無囊蛤殼或其他通量指示劑）采集了推桿巖心（N=7）。

巖心回收后儲存在冷室（4°C）中，并通過將UNISENSE鉑Eh電極（直徑0.5毫米；長度3毫米）插入沉積物表面，獲得未擾動巖心的垂直氧化還原電位（mV）剖面（1厘米間隔）。氧化還原電位在連接至懸浮在上覆水中的飽和甘汞電極的便攜式pH-毫伏計（Denver Instruments）上讀取。通過測量溶解在緩沖液（pH 4,7）中的醌氫醌的氧化還原電位來驗證電極的校準。

每個推桿巖心收集0到48個活蛤（最大殼長：28.3毫米）。每個巖心中的蛤在處理前在4°C下保存長達6小時。測量殼長（±0.1毫米），并記錄生活在蛤外套腔內的鸚鵡螺蟲多毛類（Vesicomyicola trifurcatus; Dreyer等人，2004）的數量。解剖的蛤組織在戴維森氏液中固定24小時，并儲存在70%乙醇中。

選取代表所有可用大小的60個蛤（43個來自活床，17個來自混合床）的子集，在乙醇系列中脫水并包埋在石蠟中。切割蛤前部、中部和后部區域的全動物橫截面（6微米厚），并用蘇木精和伊紅（H&E）染色。由于缺乏對該蛤物種寄生蟲多樣性的先前研究，我們依靠識別組織中的異常細胞類型或狀況，然后咨詢貝類病理學家（E. Burreson，弗吉尼亞海洋科學研究所）將寄生蟲形態類型分類到病毒樣或細菌樣包涵體的水平。使用大小、形狀、質地、顏色和感染組織來區分不同的形態類型。使用光學顯微鏡檢查每個蛤的50個橫截面的鰓、外套膜、足、性腺和消化組織。在評估載玻片時，不知道每個蛤的采集地點（活床或混合床）。

寄生蟲尺寸報告為從5到25個個體測量值的平均值。確定每個個體的寄生蟲密度（基于每個個體檢查50個橫截面的平均每橫截面數量）和血細胞浸潤的存在/不存在，并根據這些數據計算寄生蟲流行率（感染個體百分比）。

使用Spot相機（Diagnostic Instruments）記錄蛤切片中的組織質量、寄生蟲形態類型和免疫反應。使用Adobe Photoshop進行對比度調整。

結果

沉積物化學

來自蛤床（圖2A）和混合床（圖2B）的推桿巖心沉積物上部2厘米是氧化的（約+200 mV）；2厘米以下，沉積物是還原的（約-200 mV）。來自蛤殼床的推桿巖心中的沉積物（圖2C）在整個巖心中都是還原的（約-200 mV）。從背景沉積物收集的推桿巖心中的沉積物（圖2D）在整個巖心中都是氧化的（約+200 mV）。

圖 2.黑崖海丘囊蛤推桿巖心中的沉積物氧化還原剖面。（A） 活蛤床，（B） 混合（活蛤和蛤殼）床，（C） 蛤殼床，（D） 背景（非滲口）沉積物。誤差線代表平均值±1個標準誤（N=7-19個巖心）。

微寄生蟲類型

在黑崖海丘囊蛤的組織切片中觀察到六種形態類型的微寄生蟲：病毒樣外套膜和鰓上皮包涵體、細菌性腸道包涵體、鰓中的類立克次體菌落、鰓組織的細菌感染和一種原生生物寄生蟲。超過一半（60%）的受檢個體寄宿了至少一種這些寄生蟲因子。

病毒樣包涵體 I. 病毒包涵體 I（直徑10微米）位于外套膜組織中（圖3A,B）。球形或卵圓形包涵體呈嗜酸性，在光學顯微鏡下缺乏可辨別的內部結構，并具有蠟樣、玻璃紙狀特征。包涵體周圍的外套膜組織出現退化，偶爾有輕微的血細胞浸潤與這些包涵體相關。病毒樣包涵體 I 出現在8%的受檢個體中；感染密度范圍為每橫截面0到0.24個包涵體。

病毒樣包涵體 II. 在鰓上皮細胞中發現了一種較小的（直徑5微米）病毒樣包涵體（圖3C,D）。與病毒樣包涵體 I 一樣，在光學顯微鏡水平上沒有明顯的內部結構，包涵體以卵形或球形和玻璃紙狀、嗜酸性外觀為特征，包涵體周圍有一圈狹窄的（約1微米）透明組織。沒有明顯的組織損傷，也從未觀察到與病毒樣包涵體 II 相關的血細胞反應。病毒樣包涵體 II 記錄在3%的蛤中，感染密度范圍為每橫截面0到0.06個包涵體。

類立克次體鰓包涵體. 在14%的蛤中觀察到細菌性鰓包涵體。在一個案例中，在鰓絲中記錄了一個較大的、顆粒狀的、直徑為20微米的類立克次體菌落（圖4A）。其他類立克次體鰓包涵體較小，直徑約8微米（圖4B）。未觀察到與類立克次體包涵體相關的病理變化，盡管因容納包涵體導致鰓部有輕微變形。類立克次體鰓包涵體感染密度范圍為每橫截面0到0.06個包涵體。

細菌性腸道包涵體. 在10%的蛤中觀察到消化上皮細胞中一個或多個小的（直徑2-3微米）、球形的包涵體（圖4C,D）。這些包涵體與消化組織的局部（1-2微米內）退化相關，并被解釋為細菌，盡管我們不能排除其他可能性（例如壞死血細胞）。感染密度范圍為每橫截面0到0.04個包涵體。

細菌感染 I. 細菌寄生最具致病性的實例出現在28%的個體中。這種感染被稱為細菌感染 I，其特征是桿狀細菌在鰓絲之間和之中大面積、彌散的聚集（圖4E,F）。由于這些感染并不總是完全被宿主組織包圍，因此未使用“包涵體”一詞。細菌感染 I 總是與血細胞浸潤相關（每個橫截面有幾個到幾百個血細胞的聚集體[直徑200微米]）。血細胞包圍并浸潤細菌團塊，有時它們自身也被一個清晰的邊界包圍，表明被細菌空泡化。與細菌感染相鄰的鰓絲顯示出細菌細胞退化、斷裂和空間破壞的證據（圖4F）。

原生生物 I. 原生生物 I 是最流行的寄生蟲，存在于35%的受檢蛤的鰓中。原生生物 I 的感染密度范圍為每橫截面0到0.24個包涵體。原生生物 I 呈球形（直徑15微米；范圍=8微米至22微米），包在細胞壁內，通常被一個1微米到2微米厚、不規則、透明的光暈所包圍（圖5A,B）。較大標本的光暈最為明顯，寄生蟲內部呈現明顯的顆粒狀外觀，而較小的原生生物 I 寄生蟲內部往往不那么不透明且缺乏顆粒度。較小的原生生物 I 標本通常不與宿主反應相關，但較大的個體（>14微米）有時會引發包裹作用，這是一種涉及識別和隔離異物的特征性防御反應（Smolowitz等人，1997）。除了鰓結構的局部破壞和透明光暈外，沒有與此寄生蟲類型相關的病理變化。